Эффективный и недорогой процесс осветления и ультрафильтрации дрожжевых экспрессирующих рекомбинантных белков

Дрожжевая экспрессия экзогенных генов позволяет не только производить рекомбинантные белки и пептиды, антитела и вакцины, цитокины, факторы роста, гормоны и другие биологически активные вещества, но также может быть использована для производства промышленных ферментов, функциональных продуктов питания и биологических материалов, что имеет широкие перспективы применения. .

 

Система экспрессии дрожжей включает две обычно используемые системы экспрессии, а именно систему экспрессии saccharomyces cerevisiae и систему экспрессии метанотрофных дрожжей. Система экспрессии метаноловых дрожжей в настоящее время является наиболее широко используемой системой экспрессии дрожжей, а наиболее часто используемой является Pichia, которая может использовать метанол в качестве углерода и энергии. Кроме того, существуют дрожжи Хансена, Sphaeroides и так далее.

 

Независимо от типа дрожжевой системы экспрессии, ее последующие процессы разделения и очистки аналогичны, а конкретный технологический процесс использует в качестве примера дрожжевую экспрессию рекомбинантных белков и полипептидных лекарств.

 

Мембранные кассеты для микрофильтрации Guidling используют открытый канал потока и режим фильтрации с тангенциальным потоком, который может эффективно обрабатывать сложную исходную жидкость, такую ​​как жидкость для дрожжевого брожения и жидкость для крекинга E. coli, на высокой скорости и может обеспечить линейное усиление от небольших испытаний до производственных масштабов. Компактная модульная конструкция, простое подключение трубопроводов, независимость и читаемость системы позволяют защитить операторов и предотвратить биологическое загрязнение. И никакой проверки обслуживания и чистки. Поэтому он очень подходит для этапа осветления ранней последующей обработки.

 

Основной целью процесса УФ/ДФ является удаление примесей и вытеснение буферов. Мембранная кассета Guidling для ультрафильтрации имеет хорошую однородность размера пор мембраны и сильную гидрофильность, что может обеспечить более высокий поток мембраны и меньшую адсорбцию белка, а также оптимизированную конструкцию каналов потока с меньшим перепадом давления, легкой передачей материала и значительно сократить время фильтрации. Более того, серия продуктов является полной и гибкой, чтобы удовлетворить потребности различных приложений различного масштаба. Поэтому он очень подходит для этапа УФ/ДФ последующей обработки.

 

Ниже приводится пример применения мембраны Guidling.кассетав дрожжевой экспрессии рекомбинантных белков.

 

Микрофильтрационное осветление

Мы использовали мембранную кассету {{0}}0,11 квадратных метров с порами 0,22 мкм для осветления 1,5 л жидкости дрожжевого брожения (целевая молекулярная масса белка 42-55 KD) путем микрофильтрации. В течение всего процесса микрофильтрации исследовали скорость восстановления целевого белка, изменение мутности и истощение мембранного потока.

0-17мин — процесс концентрации, 17-32мин — процесс промывки и фильтрации. В течение всего процесса микрофильтрации TMP постепенно увеличивалось, скорость подачи жидкости оставалась неизменной, а средний поток материала составлял 45LMH.

Мутность жидкости составляла 600 NTU до микрофильтрации и 8 NTU после микрофильтрации, причем мутность явно менялась.

Результаты показали, что выход целевого белка составил > 90%. Мембранная кассета Guidling Technology толщиной 0,22 мкм стабильна и подходит для данного сценария применения.

 

Ультрафильтрационная концентрация

 

 

Результаты показали, что целевой белок был полностью захвачен. Мембранные кассеты Guidling Technology 10kd могут работать стабильно и подходят для данного сценария применения.

Большинство рекомбинантных белков, экспрессируемых дрожжами, не имели высокой экспрессии. Очевидно, что мутность фильтрованной жидкости снизилась, а степень извлечения белка увеличилась. Поскольку последующее хроматографическое время слишком велико, это окажет неблагоприятное воздействие на белок. Чтобы сократить время хроматографического отбора проб, можно добавить один этап ультрафильтрационной концентрации, и целевой белок можно быстро сконцентрировать после образца, что может достичь цели экономии времени, уменьшения объема наполнителя и, следовательно, снижения себестоимости продукции.

 

Мембранные кассеты для микрофильтрации Guidling Technology обычно позволяют снизить мутность исходной жидкости до уровня менее 20 NTU, полностью удовлетворяя потребности последующей ультрафильтрации и хроматографии. Скорость восстановления ультрафильтрации мембранных кассет ультрафильтрации будет варьироваться в зависимости от различных материалов, общая скорость восстановления может достигать 90-95%.

Компания Guidling Technology приглашает вас запросить тестовые наборы для соответствующей оценки.

 

О гидлинге

Guidling Technology — национальное высокотехнологичное предприятие, специализирующееся на биофармацевтических препаратах, культурах клеток, очистке и концентрации биомедицинских препаратов, диагностике и промышленных жидкостях. Мы успешно разработали центробежные фильтрующие устройства, кассеты для ультрафильтрации и микрофильтрации, вирусный фильтр, систему TFF, глубинный фильтр, полое волокно и т. д., которые полностью соответствуют сценариям применения биофармацевтических препаратов, клеточных культур и т. д. Наши мембраны и мембранные фильтры широко используются в процессах концентрации, экстракции и разделения предварительной фильтрации, микрофильтрации, ультрафильтрации и нанофильтрации. Наши многочисленные линейки продуктов, от небольших одноразовых лабораторных фильтров до производственных систем фильтрации, тестирования на стерильность, ферментации, клеточных культур и многого другого, отвечают потребностям тестирования и производства. Guidling Technology надеется на сотрудничество с вами!