SP Сильная катионообменная мембранная хроматография

Знакомство с продуктами CM для слабоионной-мембранной хроматографии

 

1. Обзор

Слабая катионообменная хроматография CM- – это технология очистки, при которой карбоксиметильные группы прикрепляются к мембране, образуя функциональный модуль. Разделение достигается на основе различий в зарядовых свойствах и плотности заряда различных биомолекул. Поскольку большинство биологических макромолекул содержат карбоксильные или гидроксильные группы, их зарядовые характеристики и величину можно регулировать путем изменения значения pH буферного раствора. После того как биомолекулы связываются с мембранным модулем, несущим противоположные заряды, элюирование осуществляется путем изменения ионной силы или pH подвижной фазы. Молекулы с более слабым сродством связывания элюируются первыми, а молекулы с более сильным сродством связывания элюируются позже, тем самым обеспечивая эффективное разделение.

 

2. Преимущества продукта

2.1 Быстро и эффективно. Высокая связывающая способность может быть достигнута при скорости потока, которая в 40 раз выше, чем при обычной хроматографии на основе смол-. По сравнению с традиционной хроматографией на насадочном слое, мембранная хроматография может сократить время процесса в 30–40 раз. Типичный рабочий расход составляет 10 МВ/мин.

2.2 Высокая эффективность связывания. Мембранная хроматография демонстрирует высокую нагрузочную способность и высокие скорости потока в условиях низкого перепада давления, что позволяет улавливать заряженные биомолекулы за один проход через модуль.

2.3 Масштабируемость и гибкость. Полный спектр продуктов для мембранной хроматографии может удовлетворить разнообразные потребности в обработке биомакромолекул, охватывая этапы от разработки процесса до крупномасштабного-производства. Конструкция капсулы позволяет использовать их-одноразово или при необходимости очищать и использовать повторно.

2.4 Повышенная производительность. Компактная конструкция сводит к минимуму занимаемую площадь. За счет исключения этапов упаковки, очистки, проверки очистки и хранения колонки обработка может начаться после уравновешивания с относительно небольшим объемом буфера. Отсутствие необходимости в упаковке, очистке или хранении колонки позволяет сократить затраты на рабочую силу более чем на 50%.

 

3 технических параметра

3.1 Конструкционные материалы

	Лабораторный масштаб	небольшой масштаб	Пилотный масштаб	Масштаб производства
Объем мембраны	0,2 мл	5мл	140мл	5L
Мембранная опорная конструкция	Полипропилен
Мембранный корпус	Полипропилен
уплотнительное кольцо	Силиконовая резина

3.2 Рабочие характеристики

	Лабораторный масштаб	небольшой- масштаб	Пилотный- масштаб	Масштаб производства
Объем мембраны	0,2 мл	5мл	400мл	5L
Рекомендуемый расход	1-6 мл/мин	25-150мл/мин	2-12л/мин	25-150л/мин
Максимальная рабочая температура	35 градусов
Максимальное рабочее давление	3 бар (25 градусов)
Максимальный перепад давления	3 бар (25 градусов)
Условия хранения	20% водный раствор этанола

По сравнению с обычными средами срок службы мембранной хроматографии CM сопоставим со сроком службы агарозного геля CM 6FF.

Рисунок 1. Изменения нагрузочной способности мембранной хроматографии CM после многократного использования при тестировании лизоцима.

Кроме того, мы оценили эффективность удаления белков и нуклеиновых кислот клетки-хозяина с помощью мембранной хроматографии. Результаты показаны ниже.

Таблица 1. Скорость удаления ДНК и белков клетки-хозяина из материала CHO-, экспрессирующего IgG, с использованием мембранной хроматографии CM

Серия экспериментов продемонстрировала, что мембранная хроматография CM может эффективно удалять загрязнения, сохраняя при этом высокую скорость восстановления целевого IgG.

	ДНК				медицинский работник
	Восстановление IgG	Содержание (пг/мг IgG) по данным RT-PCR		Фактор удаления	Содержание (нг/мг IgG) от Elisa		Фактор удаления
Бегать	%	До Q-мембраны	После Q-мембраны	Бревно	До Q-мембраны	После Q-мембраны	Бревно
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Данные по емкости загрузки при использовании мембранной хроматографии Gudiling CM по сравнению с другими марками показаны ниже.

Емкость нагрузки (мг/мл)	Цзинбяо 1	Руководство
Лизоцим	18	23
Трипсин	17	20

Таблица 2. Показатели загрузки различных белков в наш продукт по сравнению с продуктами конкурентов

Общая оценка показывает, что наша грузоподъемность сопоставима с импортной продукцией.

Рисунок 2. Испытание нагрузочной способности модуля мембранной хроматографии CM с использованием лизоцима в качестве стандартного белка.

Динамическую грузоподъемность также сравнивали с импортной продукцией. Проверка показала, что лизоцим можно элюировать с помощью 160 мМ NaCl, что позволяет эффективно захватывать большинство белков-мишеней.

Путем оптимизации различных условий элюирования мы обнаружили, что мембранная хроматография демонстрирует поведение элюирования, подобное хроматографии на агарозном геле, где чистота белка значительно варьируется в зависимости от концентрации соли. В практических исследованиях, разработках и производстве необходимо количественно определить условия равновесного элюирования для получения целевого белка высокой-чистоты.

 

4. Типичные случаи применения

• Удаление ДНК, вирусов и белков клетки-хозяина.
• Улавливание плазмид, вирусов и белков, а также очистка олигонуклеотидов.
• Обесцвечивание дрожжевого ферментационного бульона и высокая-эффективность захвата белка.

 

5. Порядок работы / Рабочий процесс

5.1:Подготовка и сборка оборудования:

5.1.1: Установка модуля мембранной хроматографии в хроматографическую систему AKTA. Метод установки аналогичен насадочной -насадочной хроматографической среде; убедитесь, что направление потока соответствует стрелке, отмеченной на модуле. Модуль можно подключить с помощью разъемов Люэра или зажимных разъемов.

5.1.2 Установите скорость потока на входе 5–10 МВ/мин и используйте уравновешивающий буфер для удаления воздуха из модуля. Продолжайте промывать до тех пор, пока на выходе не перестанут появляться пузырьки, затем подсоедините выпуск пермеата к хроматографической системе.

5.2.:Подготовка к-использованию

5.2.1: Установите скорость входного потока на уровне 5–10 МВ/мин и выполните предварительную обработку, используя 0,5 М NaOH для концентрации более 5 МВ, чтобы обеспечить достижение мембраной равновесия.

5.2.2: При той же скорости потока выполните предварительную-обработку 1 М NaCl при концентрации более 5 МВ, чтобы обеспечить достижение мембраной равновесия.

5.3. Процесс хроматографии

5.3.1 Установите скорость входного потока на уровне 5–10 МВ/мин и выполните предварительную-обработку уравновешивающим буфером при скорости более 5 МВ, пока мембрана не достигнет равновесия.

5.3.2 После предварительной -фильтрации с размером пор 0,22 мкм загрузите образец в колонку и продолжайте до тех пор, пока не будет нанесен весь образец или не будет достигнута емкость хроматографии.

5.3.3 Промывают уравновешивающим буфером более 10 МВ до тех пор, пока значение УФ не снизится до исходного уровня.

5.3.4 В соответствии с проектом процесса применяют градиентное элюирование или систему линейного элюирования и собирают фракции сегментами по мере необходимости.

5.4 Обработка CIP после-использования – CIP (очистка-на-на месте) для системы мембранной хроматографии.

5.4.1 Установите скорость потока на входе 5–10 МВ/мин и обрабатывайте 1 М NaOH в течение более 10 МВ до тех пор, пока значение УФ не упадет ниже базовой линии.

5.4.2 После 30-минутной циркуляционной промывки промойте водой до тех пор, пока pH не станет между 7 и 8, затем переключитесь на 20% этанол и продолжайте очистку до тех пор, пока проводимость не останется практически неизменной.

5.5 Хранение мембранной хроматографии

После использования и завершения CIP мембранный модуль можно снять и хранить, замочив в 20% этаноле, или хранить онлайн при комнатной температуре в растворе, содержащем 20% этанола. 20% раствор этанола следует регулярно проверять и заменять.

 

6, информация о заказе

Капсульный фильтр для слабой катионообменной мембранной хроматографии типа CM-

	Лабораторный масштаб	Малый масштаб	Пилотный масштаб	Масштаб производства
Модель	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Мембранная область	0,2 мл	5мл	400мл	5L

горячая этикетка : sp сильная катионообменная мембранная хроматография, Китай, поставщики, производители, фабрика, оптовая торговля, оптом, в наличии, бесплатный образец