Обслуживание и использование метода ультрафильтрационной трубки

Обслуживание и использование метода ультрафильтрационной трубки

Функция ультрафильтрационной трубки:

1) Концентрация; 2) обессоливание; 3) Заменить буфер; 4) Имеет эффект частичного очищения.

1. Новая ультрафильтрационная трубка может использоваться непосредственно без другой обработки;

2. Ультрафильтрационная трубка не может быть стерилизована при высокой температуре;

3. Обработка ультрафильтрационной трубки при изменении концентрированного белка

Ультрафильтрационная трубка может быть использована повторно. Замочите его в 0,1М NaOH в течение 1-2 ч, промыть водой, а затем промыть соответствующим раствором (стерилизованной водой или PBS) на центрифуге в 3 раза, что можно использовать для концентрирования нового белка;

4. Обработка нормально размещенной ультрафильтрационной трубки

Для часто используемой ультрафильтрационной трубки замочите ее в 0,1 М NaOH в течение 1-2 часов, промойте водой и замочите в стерилизованной воде. Обязательно держите фильтрующую мембрану влажной и предотвращайте рост бактерий;

5. Обработка ультрафильтрационной трубки, размещенной в течение длительного времени

Если ультрафильтрационная трубка не используется в течение длительного времени, замочите ее в 0,1M NaOH в течение 1-2 часов, промойте водой и замочите в 20% этаноле для хранения. Обязательно держите фильтрующую мембрану влажной и предотвращайте рост бактерий;

6. Центробежная скорость, используемая для ультрафильтрационной трубки

Центробежная скорость, как правило, составляет 4000 об/мин (обычно рекомендуется 3000 г, а максимальная не может превышать 4000 г). После центрифугирования в течение 5-8 минут образец объемом 4 мл можно концентрировать до менее чем 1 мл до десятков микролитров; Если скорость слишком высока, целевой белок отвалится, что приведет к потере целевого белка; Низкая скорость, трудоемкость и низкая эффективность работы;

7. Меры предосторожности, когда головка пистолета простирается в ультрафильтрационную трубку

При добавлении белкового раствора или буфера в ультрафильтрационную трубку можно использовать синюю головку пистолета; Однако, когда концентрированный целевой белок всасывается со дна ультрафильтрационной трубки, необходимо использовать желтую головку пистолета; Когда головка пистолета вставлена в ультрафильтрационную трубку, она должна не касаться фильтрующей мембраны, чтобы избежать прокола фильтрующей мембраны;

8. Уменьшить потерю адсорбции белка в ультрафильтрационной трубке

Мембрана ультрафильтрационной трубки может адсорбировать белок, что уменьшит белок-мишень примерно на 30%; Чтобы уменьшить потерю белка, после поглощения раствора белка-мишени продуть дно ультрафильтрационной трубки белковым буфером, чтобы промыть большую часть белка, адсорбированного фильтрующей мембраной, и уменьшить потерю белка-мишени; Если очищенный белок концентрированный, обратите внимание, что концентрированный объем не должен быть слишком маленьким; Как правило, независимо от того, насколько центрифугирован, около 200 μ раствора L-белка будет удерживаться на дне;

9. Как определить неисправность ультрафильтрационной трубки

При нормальном использовании, когда фильтрующая мембрана не проколота, концентрированный белковый раствор не содержит белка или его количество очень низкое (включая целевой белок), в то время как первый фильтрованный раствор содержит целевой белок, это указывает на то, что фильтрующая мембрана недействительна и должна быть заменена новой ультрафильтрационной трубкой.