Мембранная технология и уточнение вакцин (Ⅱ)

В предыдущей статье мы имели некоторое предварительное введение в вакцины и стратегии разъяснения вакцин, и мы продолжим изучать их в оставшейся части этой статьи. Исходя из вышесказанного, мы продолжим делиться разъяснениями вакцин и соответствующими применениями мембранных тканей.

 

2.2.2 Влияние физических и химических свойств вируса

После рассмотрения производственной системы и методов удаления соответствующих загрязняющих веществ на этапе осветления важно принять во внимание характеристики вируса и сосредоточиться на максимальном увеличении выхода вируса.

 

2.2.2.1 Легкая адсорбция вирусов
Положительно заряженные материалы и фильтрующие добавки (например, диатомит) были разработаны для улучшения эффектов глубокой фильтрации. Хотя положительный заряд увеличивает захват нуклеиновых кислот и HCP, известно, что диатомит связывает клеточный дебрис и коллоиды. Однако эти материалы также могут удерживать вирус через механизм адсорбции. Поскольку вирус обычно отрицательно заряжен в растворе, могут возникать электростатические взаимодействия с положительно заряженным фильтром.
Вирусы также могут связываться посредством гидрофобных или неспецифических взаимодействий с определенными фильтрующими материалами (такими как диатомит или стекловолокно). Оболочечные вирусы из-за своей липидной оболочки более восприимчивы к этой адсорбции. Если вирус адсорбируется на фильтре посредством электростатических взаимодействий, а вирусные частицы отсоединяются из-за конкуренции солей, промывка фильтра высокопроводящим буфером может частично восстановить вирус. Однако это может также вымывать загрязняющие вещества, такие как HCP или нуклеиновые кислоты. Поэтому предпочтительным является использование альтернативного фильтрующего материала, такого как более инертный полипропилен.
Adenovirus is easily adsorbed, but different results have been confirmed. Using positively charged diatomite and deep filters. Borosilicate glass fiber filter material is also very well recovered. On the other hand, a patent proposed by Weggeman involving clarification of 20 – 40% adenovirus losses at PER, et al. Cell cultures were prepared with similarly positively charged deep filters containing diatomite. In this case, the nominal polypropylene filter showed a very high viral recovery rate (> 90%).
Хорошо известно, что вирусы гриппа склонны к адсорбционным потерям во время осветления. Поэтому использование фильтра без заряда, фильтра на основе полипропилена, подходит для осветления коллекции гриппа. Томпсон и др. сообщили об использовании номинального полипропиленового фильтра 1,2 мкм с последующей мембраной PVDF 0.45 мкм для осветления клеточного вируса гриппа, произведенного клетками MDCK. Всего было проведено девять тестов на очистку в масштабе 20 л с загрузкой 111 л/м2 для полипропиленового фильтра 1,2 мкм и 105 л/м2 для фильтра PVDF 0,45 мкм. Результаты показали, что большинство работающих вирусов хорошо восстановились (78-154%). Они также сообщили об удалении до 58% hcDNA, но не о значительном удалении HCP.

 

2.2.2.2 Отсечение чувствительных вирусов

Некоторые вирусы (инкапсулированные или неинкапсулированные) проявляют низкую механическую устойчивость и могут быть разрушены сдвиговым воздействием во время этапов центрифугирования и мембранной фильтрации. Сдвиговые усилия, возникающие во время этапов очистки, включающих фильтрацию или хроматографию, могут привести к падению вирусной оболочки, что повлияет на инфекционность. В зависимости от размера, толщины и геометрии капсида вирусный капсид может быть хрупким или, наоборот, устойчивым к высокому давлению. Некоторые оболочечные вирусы, такие как вирусы гриппа, эластичны к механическому напряжению и могут выдерживать большую деформацию. С другой стороны, сдвиговое усилие может привести к падению оболочки менее устойчивых вирусов, таких как ретровирусы, что повлияет на инфекционность вируса.

Внеклеточно образованные оболочки VLP также очень уязвимы. Высокие скорости сдвига генерируются в процессе центрифугирования, в основном на входе и выходе (высокие скорости сдвига генерируются на границе раздела газ-жидкость). Когда вирус очищался градиентным центрифугированием, способность трансдукции некоторых ретровирусов была значительно ослаблена. При проектировании центробежного разделения необходимо учитывать относительную нестабильность вирусных частиц к сдвиговым силам. Центробежная сила не является единственным источником сдвигового удара, более важным является конструкция оборудования, особенно на импорте и экспорте, которые также имеют значительный сдвиговый удар. Различия в конструкции разных масштабов могут привести к различиям в выходе и извлечении вирусов, чувствительных к сдвигу, в разных масштабах.

Сдвигочувствительные вирусы должны быть тщательно спроектированы, поскольку величина сдвигового напряжения и время воздействия напряжения (из-за рециркуляции) могут быть высокими. Для сдвигочувствительных вирусов предпочтительны устройства с открытым контуром (устройства с полыми волокнами или открытыми пластинами) для снижения турбулентности и сдвиговых сил в канале подачи.

Выбор рабочих параметров также должен минимизировать повреждение вирусных частиц: низкий поперечный поток, среднее трансмембранное давление (ТМД) и короткое время обработки.

Загрязнение мембраны под высоким давлением приводит к потере вирусной инфекционности, возможно, из-за сил, которые сдвиговое действие может оказывать на вирусную оболочку. Разделение на основе мембраны основано на размере, а накопление вирусных ингибиторов с большой молекулярной массой и вирусных частиц может снизить инфекционность вирусных векторов.

Деградация вирусов, чувствительных к сдвигу, во время глубокой фильтрации широко не документирована. Потеря вирусов при глубокой фильтрации чаще всего объясняется улавливанием, адсорбцией или зависящей от времени и температуры вирусной деградацией продукта. Фактически, даже несмотря на то, что в системах NFF может возникать механическое напряжение, время воздействия сдвигающего усилия на продукты NFF очень короткое по сравнению с другими технологиями из-за быстрого одиночного прохода, наблюдаемого в продуктах NFF.

 

2.2.2.3 Перехват в соответствии с размером апертуры

Вирусы более 100 нм можно удержать, удалив микоплазму или стерильные мембраны (0.22 мкм и ниже). В этом случае особое внимание следует уделить выбору фильтров. Для микрофильтрационных этапов TFF предпочтительны мембраны 0.45 мкм или 0,65 мкм для хороших каналов продукта. Для многоступенчатой ​​фильтрации NFF самый плотный слой больше или равен 0,45 мкм. Следует проявлять осторожность при выборе глубокого фильтра, так как некоторые устройства для глубокой фильтрации могут содержать слой пленки, что может привести к потере продукта из-за удерживания. Агрегация вирусов отрицательно влияет на производство вирусов и усиливает удержание вирусов из-за размера вируса.

Согласно патенту Андре и Шамплювье, гомогенизация может предотвратить или ограничить засорение фильтра за счет уменьшения размера агрегата, обеспечивая более высокий выход. Гомогенизация также улучшила фильтрующую способность урожая, которая увеличилась в 2.4-3 раза.

Слишком большое количество примесей может помешать восстановлению вируса. Примеси, как правило, засоряют фильтр, а засоренные поры мембраны могут привести к снижению скорости прохождения вируса. В патенте де Вохта и Веенстры упоминается, что прямое очищение высокой плотности клеток Per. Сбор с помощью TFF (мембрана {{0}}.65 или 0.2 мкм) привел к восстановлению вируса без аденовируса. Восстановление может быть достигнуто путем селективного удаления осаждением ДНК клетки-хозяина перед шагом TFF ​​0,65 мкм. 70% аденовирусов.

 

 

2.3 Пример: Оптимизация разъяснения вирусной вакцины

На Международной конференции по биологическим процессам 2011 года компания Sanofi Pasteur представила рациональный подход к скринингу фильтров для разработки новых очищенных последовательностей для потенциальных вирусных вакцин. Целью исследования является преодоление проблем, возникающих при оптимизации процессов культивирования клеток и вирусов. Изменения в процессе upstream привели к потере 20% выхода и преждевременному загрязнению фильтра на этапе очищения, что привело к отсутствию масштабирования. Для создания надежного и масштабируемого этапа очищения потребовалась полная переработка последовательности фильтров с показателями восстановления вирусов выше 85%.

Based on internal experience and scientific publications, the team selected 27 filters for an initial screening study. Small scale virus adsorption tests were performed on various filter media (polypropylene, nylon, cellulose ester, glass fiber, charged adsorption filter) and structures (pleated or deep filter). The virus yield was measured by ELISA and the clarifying efficiency of the preselected filtrate was compared by checking the reduction of turbidity. Preliminary screening studies showed that nylon and charged filters retained viral particles and virus recovery. Ten percent. The virus recovery rate of polypropylene and polyether sulfone filter was >. 80%. Степень восстановления фильтров из эфира целлюлозы и стекловолокна зависит от оценки фильтра (20% или 90%).

В качестве второго шага компания Sanofi Pasteur оценила несколько комбинаций (последовательности фазы 2 или фазы 3) семи фильтров, предварительно выбранных в скрининговом исследовании. Тест классификации постоянного потока проводился с небольшим фильтром. Кроме того, в этом эксперименте использовалась более высокая производительность, чем в скрининговом исследовании. На основании результатов вирусного восстановления и производительности фильтра команда выбрала две лучшие комбинации для дальнейшего исследования.

- Последовательность 1 (Этап 2): 30 мкм складчатый полипропиленовый предварительный фильтр с номинальным номиналом, за которым следует композитный фильтр из эфира целлюлозы и стекловолокна (пористость 1/0,5 мкм)

- Последовательность 2 (этап 3): тот же предварительный фильтр (полипропиленовый фильтр с номинальным размером ячеек 30 мкм), за которым следует промежуточный многослойный полипропиленовый фильтр и, наконец, асимметричная полиэфирсульфоновая пленка.

 

The robustness of these two clarified sequences has been challenged by repeated constant flow sizing experiments with different harvest batches. While both potential sequences demonstrated enhanced capabilities compared to the reference sequence, only sequence 1 achieved virus recovery objectives (>85%), как показано на рисунке 1.

Рисунок 1. Среднее восстановление вируса на каждом этапе фильтрации. Исследования стабильности были оценены для трех последовательностей фильтрации, из которых только последовательность 1 с использованием 30 мкм номинального складчатого полипропилена и 1.0/0,5 мкм фильтра из эфира целлюлозы и стекловолокна достигла глобального целевого показателя восстановления.

Центрифугирование также оценивалось как первичный этап осветления, за которым следовала окончательная фильтрация {{0}}.45 мкм. Было протестировано несколько пар скорость/продолжительность. Хотя скорость фильтрации 0,45 мкм была увеличена в два раза, конечный выход оказался ниже целевого значения 85%. В результате центрифугирование не изучалось далее.

Наконец, производительность последовательностей фильтрации полипропилена и стекловолокна была оценена в большем масштабе (размер биореактора 160 л). Последовательность фильтрации показана на рисунке 2.

Рисунок 2 Поясняет комбинацию фильтров и графическое представление выхода шага строки. Последовательность A — традиционный процесс, а последовательность B — оптимизированный процесс. Оптимизированная последовательность B может уменьшить площадь предварительной фильтрации в 3 раза, отменить промежуточный этап фильтрации и уменьшить площадь окончательной фильтрации в 10 раз, тем самым увеличивая глобальное извлечение вирусов на 3%.

Несколько партий были успешно очищены без признаков засорения фильтра, время процесса соответствовало производственным ограничениям, а выход вируса составил > восьмидесяти пяти процентов. Оптимизация этапа очищения не повлияла на последующие этапы и ключевые качественные характеристики вакцины. Поэтому выбранная последовательность очищения была использована в процессе производства вакцины (биореактор объемом 1000 л), и производительность была успешно подтверждена.

 

03 Разъяснение бактериальных вакцин

3.1 Соображения относительно разъяснения бактериальных вакцин

Согласно Medical Thesaurus (2015), бактериальная вакцина определяется как суспензия разведенных или убитых бактерий или их антигенных производных, которая используется для индукции иммунного ответа с целью профилактики или лечения бактериальных заболеваний. В более общем плане бактериальные вакцины можно разделить на четыре подкатегории в зависимости от типа активного антигена. Этот агент может быть:

- Убивает или ослабляет все живые бактерии. Также известна как вакцина БЦЖ.

- Очистка антигенных детерминант (субъединичные вакцины). Вакцина против сибирской язвы или бесклеточная коклюшная вакцина.

- Бактериальные токсины (анатоксины). Анатоксины дифтерийные и столбнячные.

- Плазмида (пДНК).

Из-за большой гетерогенности продуктов семейства, проблемы процесса вверх и вниз по течению во многом зависят от типа производимой вакцины. Поэтому после начального этапа ферментации можно очищать или не очищать, чтобы можно было провести этап осветления.

 

3.2 Стратегия уточнения бактериальных вакцин

3.2.1 Анатоксин

Два наиболее распространенных анатоксина, производимых для использования в вакцинах, — это дифтерийный и столбнячный, которые производятся Corynebacterium diphtheriae и Clostridium tetani соответственно. Производство обеих вакцин подчиняется строгим нормативным требованиям. Технический отчет ВОЗ и приложения к нему содержат четкие рекомендации по обеспечению качества, безопасности и эффективности вакцин против столбняка и дифтерии. Общие правила надлежащей производственной практики применяются к производству обеих вакцин, и сотрудники должны быть надлежащим образом обучены и получать повторную иммунизацию против обоих заболеваний.

GMP строго требует, чтобы чистота и качество конечного продукта были продемонстрированы. Согласно ВОЗ и ЕП, эффективность конечной вакцины против столбняка должна быть определена путем сравнения in vivo или любым другим проверенным методом с соответствующим эталонным веществом, откалиброванным в международных единицах в соответствии с Международным стандартом для столбнячного анатоксина. Обновленные требования к эффективности были опубликованы в 2011 году и могут различаться в зависимости от метода оценки. Безопасность (отсутствие токсинов и восстановительная токсичность) каждой партии вакцины также должна быть продемонстрирована. Наконец, необходимо рассмотреть стабильность вакцин, особенно в реальном времени.

 

3.2.2 Плазмидная ДНК-вакцина

Вакцины на основе плазмидной ДНК используются для ветеринарных целей, а несколько вакцин на основе плазмидной ДНК для человека находятся на разных стадиях разработки и клинической оценки. После ферментации E. coli бактерии собираются и расщепляются для высвобождения плазмидной ДНК.

Удаление клеточного детрита обычно осуществляется центрифугированием или фильтрацией. Тема была подробно освещена в недавних публикациях. В этой публикации рассматриваются текущие процессы и проблемы восходящего, нисходящего и формулирования pDNA.

Авторы также дают представление о пробелах на каждом этапе типичного процесса производства pDNA и потенциальных будущих инновациях и/или текущих технологических пробелах, которые могут привести к дальнейшей оптимизации процесса.

Вакцины на основе плазмидной ДНК готовятся в два этапа. Во-первых, бактериальные клетки удаляются из питательной среды, а во-вторых, удаляется клеточный дебрис после лизиса клеток. В зависимости от масштаба клетки собираются с помощью центрифугирования или микрофильтрации TFF. Центрифуга с дисковым куском периодически выталкивает материал с высокой скоростью, а выход суперспирализованных плазмид недостаточен из-за повреждения при сдвиге во время выгрузки. Если необходимо использовать центрифугирование, лучше всего подойдет центрифуга с твердой чашей. Хорошо подойдут открытые канальные, плоские устройства TFF с микрофильтрационными мембранами 0.1 или 0.2 мкм или устройства с полыми волокнами.

Поскольку устройства с полыми волокнами имеют высокую твердую нагрузку, им иногда отдают приоритет. Обычно эти процессы работают при 3-5 раз большей концентрации, за которыми следуют 3-5 объемов трансфильтрации. Для того чтобы уменьшить сдвиг и лучше контролировать поляризацию мембраны, настоятельно рекомендуются операции контроля проникновения. Хотя центрифуги более рентабельны в крупномасштабных коммерческих операциях, в процессах меньшего масштаба, как правило, используется фильтрация из-за портативности и простоты эксплуатации.

Для облегчения обработки использовались флокулянты, но это может привести к потере продукта. Некоторые также рекомендуют использовать инертные частицы диатомита с последующей фильтрацией через мешки.

Cell lysis produces viscous products, including large particles, cell fragments, soluble impurities, fine colloidal particles, and pDNA. Due to the complexity of the material, removing such fine solids is a difficult separation. Gradient density deep filter or open hole structure (>0.45m) мембранные фильтры хорошо удаляют клеточный дебрис. Из-за сильного засорения клеточным детритом предпочтительна фильтрация с низким потоком или низким давлением. Для этого этапа использовались микрофильтры на основе Tff и промышленные мешочные фильтры. Статический (в смесительном сосуде) и непрерывный (с использованием встроенного статического смесителя) крекинг требует разных фильтров.

 

3.3 Пример: сравнение эффективности центрифугирования, методов NFF и TFF для очистки от столбнячных токсинов

Мунианди и др. сравнили три различных метода очистки токсинов столбняка и анатоксинов из ферментационных жидкостей, а именно центрифугирование, глубокую фильтрацию (NFF) и TFF. Тестовый материал был получен в ферментере объемом 400 л с использованием модифицированной среды Миллера (MMM). В исследовании центрифугирования клетки отделялись от сердца при 4000 об/мин в контейнере 6 × 1 л в течение 60 мин. Образцы супернатанта были взяты для определения восстановления анатоксина. Глубокая фильтрация использует фильтры с размером ячеек 0,45 мкм и 0,22 мкм, содержащие диатомовую землю и целлюлозу, для очистки ферментационного бульона. Процесс проводится при температуре 35 градусов и 12 фунтов на кв. дюйм.

Модуль TFF с открытой плоской панелью термически связан с мембраной PVDF 0.22μm в методе TFF. Процесс осветления на основе TFF проводился при скорости поперечного потока 2000 л/ч при 23 градусах, а осветленный фильтрат концентрировался при скорости поперечного потока 1000 л/ч при 25 градусах с использованием обычной сэндвич-мембраны TFF 30kD PES. Осветленная мясная жидкость (около 6 л) концентрируется в 10 раз в этом процессе ультрафильтрации. Тесты на столбнячный анатоксин проводились на образцах концентрированных фиксаторов для оценки восстановления продукта.

Глубокая фильтрация привела к степени извлечения продукта приблизительно 89%, а блоки TFF привели к степени извлечения продукта более 97%. Процессы микрофильтрации и ультрафильтрации неизменно дают более высокую степень извлечения продукта, чем процесс NFF. Эти результаты основаны на тестах флокуляции (Lf).

 

04Разъяснение полисахаридных вакцин

4.1 Рассмотрение разъяснений по полисахаридным вакцинам

Процесс производства как несвязанных/свободных полисахаридных вакцин, так и связанных полисахаридных вакцин начинается с культивирования бактерий-хозяев в ферментере. В конце ферментации бактерии можно обработать очищающими средствами, такими как DOC (дезоксихолат натрия), Triton®X-100 или другими подходящими реагентами, чтобы уничтожить бактерии и способствовать высвобождению полисахаридов. Из-за большой емкости батареи сбор напрямую через NFF экономически нецелесообразен, поскольку пропускная способность может быть очень низкой. Поэтому идеальным выбором является использование центрифуги для разделения клеточных комков. Также можно использовать диапазон микрофильтрации TFF. Бесклеточный центр/пенетрант, содержащий интересующий полисахарид, дополнительно очищается с помощью системы глубокой фильтрации NFF, за которой следует биофильтрация, а затем поступает на последующую обработку для дальнейшей очистки.

 

4.2 Стратегия уточнения полисахаридной вакцины

4.2.1 Первая процедура разъяснения

Центрифугирование является одним из наиболее распространенных методов отделения клеток от ферментационных жидкостей. В зависимости от масштаба можно выбрать непрерывное центрифугирование или периодическое центрифугирование. Важно отметить, что правильная оптимизация условий центрифугирования и их работы имеет важное значение для успешной очистки на выходе. При выборе конкретной мембраны TFF и размера пор важно учитывать молекулярную массу полисахаридов, которые часто являются большими и структурно сложными, с молекулярными массами в диапазоне от приблизительно 500кДа до более чем 1000кДа. Благодаря большому размеру открытых пор использование мембран MF 0,22 мкм, 0,45 мкм, 0,65 мкм может обеспечить успешное извлечение молекул PS в осмотическом растворе.

 

4.2.2 Вторичная процедура уточнения

Прозрачность/мутность раствора ферментации без клеток, который достигает стадии вторичного осветления, зависит от конкретных бактерий, типа расщепления, индивидуального типа сыворотки и метода, используемого для стадии первичного осветления. Мутность центра может варьироваться от примерно 50 до 150 NTU. Положительно заряженный фракционный фильтр глубокой плотности, изготовленный из пропитанного диатомита с заполненными целлюлозными волокнами, может использоваться для осветления и снижения его мутности до < 5NTU.

Объемная пропускная способность этого глубокого фильтра может варьироваться от приблизительно 150 л/м3 до 250 л/м3. Обычно очищенный раствор продукта фильтруется через последующую мембрану 0,45 мкм биоподдерживаемого восстановительного класса или 0,22 мкм стерилизуемого класса для удаления любых оставшихся частиц клеток, коллоидов и потенциальных микроорганизмов.

 

4.3 Пример: Очищение центра ферментационного бульона Streptococcus pneumoniae после центрифугирования

Клетки разделяли путем добавления {{0}}.1% (об./об.) ферментационного бульона Streptococcus pneumoniae типа 8 (20 л) путем непрерывного центрифугирования. Центр сбора фильтруют через два отдельных положительно заряженных и диатомовых глубоких фильтра, содержащих целлюлозные волокна. Затем отдельный фильтрат глубокого фильтра фильтровали через биозагруженную восстановительную мембрану PVDF 0,45 мкм. Все фильтрационные тесты проводили в режиме постоянного потока с помощью перистальтических насосов. Фильтрационные тесты с использованием заряженного глубокого фильтра и ферментационного бульона Streptococcus pneumoniae серотипа 8 привели к снижению мутности примерно со 120 NTU до 3 NTU. Тесты проводили при скорости потока 140 150 л/м2/ч и конечной разнице давления 20-25 фунтов на кв. дюйм с пропускной способностью примерно 180-200 л/м2.

Аналогичные фильтрационные испытания были проведены на ферментационном бульоне Streptococcus pneumoniae серотипа 19A. Центрифугированная жидкость 19A очищается через заряженный глубокий фильтр, который снижает мутность с примерно 40 NTU до 3 NTU. Испытания проводились при постоянной скорости потока около 140-160 л/м2/ч, а объемная пропускная способность 200-230л/м2 была достигнута при конечном давлении около 15 фунтов на кв. дюйм. Анализ HLPC образцов продукта, собранных во время оценочных испытаний фильтрации, не показал значительной потери выхода для глубокой фильтрации или мембран 0.45 мкм (или 0,22 мкм).

 

05 Заключение

Разработка процессов осветления требует интеграции нескольких единичных процессов, таких как центрифугирование, TFF-MF, глубокая фильтрация и асептическая фильтрация. Оптимизация процесса осветления требует понимания того, как различные единичные операции влияют друг на друга. Задача состоит в выборе технологий и инструментов (оборудования и приспособлений) для удовлетворения все более сложных требований к технологическим жидкостям, производимым современными более эффективными биореакторами. Увеличение производительности на входе (титр вирусов, плотность клеток и т. д.), клеточный дебрис и продукты лизиса клеток увеличивают сложность процесса осветления и усложняют выбор оборудования для разделения и фильтрации.

При выборе масштаба процесса следует учитывать конструкцию оборудования, простоту использования и чистоту. Это обеспечит эффективную конверсию и безопасность оператора при работе с отбракованными фильтрами. Для разработки процесса осветления важна сильная интеграция этапов осветления, чтобы гарантировать, что обработка урожая, собранного выше по течению, является экономически эффективной. Для упрощения лабораторных испытаний, пилотного производства и полномасштабной обработки доступен ряд фильтрационных установок. Внедряя хорошо продуманный план масштабирования работ, который оценивает несколько вариантов осветления, можно уверенно выбирать и определять размер фильтров осветления для защиты операций ниже по течению при одновременном снижении эксплуатационных расходов.

Очистка вакцины представляет собой ряд проблем. Обычно процесс фильтрации должен быть адаптирован к производственной системе, агенту инактивации или лизиса и презентации антигена, а не обязательно к вакцинам. Традиционные процессы вакцинации обычно используют центрифугирование для первоначальной очистки вакцины. Современные вакцины с несколькими технологическими платформами и меньшими объемами обработки делают вакцины более подходящими для очистки с помощью мембранных технологий. Недавно разработанные вакцины с использованием современных клеточных линий и систем экспрессии, а также с использованием более определенных условий культивирования клеток делают многие процессы вакцинации более благоприятными для фильтрации.

 

Однако гетерогенность антигенного компонента или «целевого антигена» вакцинных продуктов увеличивает сложность фильтрации очистки. Антигены различаются по размеру, поверхностной химии и заряду. Эти характеристики влияют на выход и извлечение антигенов. Вакцины представляют уникальные проблемы для очистки, в основном из-за размера их макромолекул. Это, в сочетании с проблемами возможностей очистки, увеличивает потребность в руководстве по стратегиям разработки процесса.

Размер и масштаб коммерческой операции по производству вакцин оказывают значительное влияние на выбор технологии осветления. Расположенная выше по течению процесса, правильная оптимизация осветления имеет решающее значение для успеха операций последующих блоков, максимизируя выход, восстановление и надежность процесса. В то время как центрифугирование остается жизнеспособным техническим вариантом для первичного осветления, микрофильтрационные установки с открытым каналом (TFF) для первичного осветления и тонкие глубокие фильтры или мембранные фильтры для вторичного осветления получают признание в вакцинной промышленности. Это изменение обусловлено потребностью в более быстрой обработке, быстрой разработке процесса, портативных процессах и одноразовых реализациях. NFF предлагает экономичный процесс, подходящий для небольших и крупных вариантов одноразового использования. В связи с меняющимися нормативными требованиями доступность предасептических устройств или модулей гамма-облучения, предназначенных для автоклавирования, способствует более быстрой адаптации технологий на основе NFF или TFF.

Многие классические процессы вакцинации включают эволюцию операций блока очистки, в основном из-за нормативных ограничений и связанных с этим высоких затрат на повторную валидацию и повторную подачу или клинические испытания. Процесс платформы, использующий схему очистки на основе фильтрации, широко использовался в нескольких биологических агентах с высокой степенью успеха. Примеры и случаи, описанные в этом документе, показывают, что производители вакцин имеют потенциал для достижения этого уровня стабильности, экономической жизнеспособности и одноразовой полезности, следуя шаблонному подходу.

Другие преимущества фильтрации перед центрифугированием — это вирусы, чувствительные к сдвигу, или вирусы, которые имеют тенденцию накапливаться на границе раздела воздуха. Поскольку производители устройств выводят на рынок новые продукты, производители вакцин будут по-прежнему лучше оснащены для процесса очистки.

 

Как первая компания в цепи локализации, Guidling Technology накопила достаточный соответствующий опыт в очистке вакцин. Guidling Technology — это компания по разработке и производству, специализирующаяся на биофармацевтике и клеточной культуре, очистке и разделении. Продукция широко используется в биомедицине, диагностике, промышленной фильтрации жидкостей, обнаружении, очистке, очистке и концентрировании; Guidling успешно разработала ультрафильтрационную центрифужную пробирку, ультрафильтрационную/микрофильтрационную мембранную кассету, фильтр для удаления вирусов, тангенциальное проточное фильтрующее устройство, глубокий мембранный стек и т. д., которые полностью соответствуют сценариям применения биофармацевтики и клеточной культуры.

Наши мембраны и мембранные фильтры широко используются в концентрировании, экстракции и разделении предварительной фильтрации, микрофильтрации, ультрафильтрации и нанофильтрации. Наш широкий ассортимент продукции, от небольших одноразовых лабораторных фильтров до систем фильтрации производственного типа, испытаний на стерильность, ферментации, культивирования клеток и многого другого, может удовлетворить потребности испытаний и производства.