Мембранная технология и уточнение вакцин (Ⅰ)
Вакцины поступают из различных источников, включая экстракты тканей, бактериальные клетки, вирусные частицы, белки и нуклеиновые кислоты, вырабатываемые рекомбинантными клетками млекопитающих, дрожжами и клетками насекомых.
Наиболее распространенный метод производства вакцин основан на первоначальном процессе ферментации с последующей очисткой. Производство вакцин — сложный процесс, включающий множество различных этапов и процессов. Выбор правильного метода очистки имеет решающее значение для достижения желаемой чистоты конечного продукта. Очистка вакцин — важный этап, который оказывает значительное влияние на извлечение продукта и последующую очистку. Для очистки вакцин можно использовать несколько методов. Выбор метода сбора и оборудования зависит от типа батареи, природы собираемого продукта и технологической жидкости. К этим методам относятся мембранная фильтрация (микрофильтрация, тангенциальная проточная фильтрация), центрифугирование и глубокая фильтрация (фильтрация с нормальным потоком). Из многолетнего опыта следует, что очистка урожая вакцин обычно достигается центрифугированием с последующей глубокой фильтрацией.
В последние годы мембранные технологии приобрели известность в очистке вакцин. В процессах на начальном этапе все чаще используются одноразовые технологии, поэтому стратегии сбора должны меняться. В этой статье представлен всесторонний обзор различных мембранных технологий и их применения в очистке вакцин.
01 Введение
Вакцины являются важнейшим компонентом нашей профилактики инфекционных заболеваний, которые остаются шокирующей причиной смерти. Ежегодно от дифтерии, столбняка, коклюша и кори спасаются от 2 до 3 миллионов человек благодаря иммунизации. Вакцины охватывают широкий спектр, от небольших рекомбинантных белков до целых вирусных частиц и целых бактерий. Они могут быть получены различными системами: яйцами, клетками млекопитающих, бактериями и т. д. Из-за сложности и разнообразия вакцин в настоящее время не существует общепринятого протокола очистки или шаблона, несмотря на растущий интерес к платформам вакцин.
Обычно процесс вакцинации можно разделить на три части: восходящая (производство и осветление), нисходящая обработка (очистка, включая ультрафильтрацию, хроматографию и химическую обработку) и формулировка (операции по окончательному заполнению). Независимо от производственной системы, осветление (начальное удаление нежелательных веществ) играет ключевую роль в определении надежного процесса очистки. Надлежащий этап осветления в основном удаляет целые клетки, клеточный дебрис, коллоиды и крупные агрегаты, чтобы уменьшить нагрузку на последующую обработку. В некоторых случаях осветление может также уменьшить нерастворимые примеси, белки клетки-хозяина (HCP) и нуклеиновые кислоты клетки-хозяина. Как и любой другой этап очистки, этап осветления необходимо оптимизировать для достижения максимального выхода и чистоты продукта, адаптируясь к специфике и производственным ограничениям вакцины.
В связи с неоднородностью типов вакцин для их очистки используются различные методы, включая центрифугирование или фильтрацию (таблица 1).
Обычно для достижения желаемого осветления требуется несколько серий операций. Первая операция предназначена для удаления более крупных частиц (первичное осветление), а вторая операция предназначена для удаления коллоидов и других субмикронных частиц (вторичное осветление). Низкоскоростное центрифугирование служит одноразовым вариантом осветления, позволяя удалять клетки и клеточный дебрис путем осаждения. Центрифугирование может обрабатывать высокие твердые нагрузки и широко используется в периодическом или непрерывном режиме и дисковых центрифугах. Оно требует больших капиталовложений и затрат на техническое обслуживание и сталкивается с проблемами при увеличении масштаба из-за отсутствия надежной модели уменьшения масштаба. Однако некоторые коммерческие производители вакцин используют центрифуги в крупномасштабном производстве, включающем большие объемы обработки и больше производственных операций.
Фильтрация осветления может быть выполнена с помощью фильтрации нормального потока (NFF, также известной как тупиковая фильтрация) или фильтрации тангенциального потока (TFF, также известной как перекрестная фильтрация). Существуют также особые режимы фильтрации (глубокие фильтры), которые содержат положительно заряженные материалы и фильтрующие вспомогательные средства, которые улучшают удержание клеточного детрита, коллоидов и отрицательно заряженных нежелательных компонентов.
Мембранные фильтры задерживают частицы за счет исключения размера и не обладают высокой способностью удерживать грязь, поэтому они подходят для вторичных этапов осветления. Как глубинные фильтры, так и мембранные фильтры легко масштабировать и внедрять (простая конструкция системы). В отличие от NFF, TFF в основном используется для первичного осветления (микрофильтрации). Мембраны с диапазоном отсечки 0.1-0.65 мкм (предпочтительно с открытым каналом) успешно использовались для задержания клеток, клеточного детрита и других крупных загрязнений. Большая часть оборудования TFF линейно масштабируется и может использоваться повторно после очистки, что значительно снижает стоимость расходных материалов для этапа.
Этап очистки находится между предшествующими и последующими процессами и иногда упускается из виду в ходе разработки процесса вакцины, поскольку время и ресурсы отдаются приоритет другим этапам очистки, таким как хроматография или центрифугирование в градиенте плотности.
Даже патенты на процессы производства вакцин часто пропускают этап осветления. Эффективность осветления напрямую влияет на производительность последующего процесса. Плохо оптимизированный этап осветления может негативно повлиять на производительность стерилизованного фильтра или сократить срок службы хроматографической смолы. Сегодня более жесткие нормативные требования, как правило, заставляют производителей вакцин производить более чистые, хорошо охарактеризованные, но доступные вакцины. В этом случае каждому этапу необходимо уделять должное внимание. Современные тенденции предполагают, что предшествующий процесс движется в сторону «более чистой» системы экспрессии (т. е. клетки, культивируемые в бессывороточной среде, заменяют яйца) с повышенной производительностью и более высокой плотностью клеток.
Процессы очистки на выходе упрощаются и оптимизируются для повышения чистоты конечного продукта. Чтобы справиться с этими изменениями, этап осветления не может стать узким местом. В этом случае технология фильтрации сталкивается с новой задачей осветления, решая вопросы повышения гибкости процесса, возможности одноразового использования и снижения инвестиционных затрат.
02 Разъяснение по поводу вакцин против вирусов
Для очистки урожая на конечном этапе производства вакцин успешно использовались несколько типов методов очистки, как по отдельности, так и в сочетании.
Пилотный масштаб:1-20л, производственный масштаб: более 20л
2.1 Меры предосторожности при вакцинации против вируса
Многие вакцины содержат все или часть вирусных частиц для формирования иммунитета против вирусной инфекции. Они обычно делятся на четыре широкие категории:
Живая аттенуированная вакцина (LAV), которая основана на ослабленном штамме вируса для снижения его вирулентности. Ослабленные вирусы могут размножаться в организме, но не являются патогенными.
- Инактивированные вирусные (IV) вакцины, которые содержат химически или ультрафиолетово инактивированные вирусы для устранения инфекционности. Вирусные частицы могут быть полными, разделенными или очищенными (только антигенные белки).
- Вакцина на основе вирусного вектора (VV) представляет собой активный непатогенный вирус, представляющий антиген патогенного вируса. Эти недавно разработанные структуры также используются для генной терапии.
Вакцины на основе вирусоподобных частиц (ВПЧ) — особый класс вакцин на основе вирусных субъединиц, которые имитируют общую структуру вирусных частиц, но не содержат инфекционного генетического материала.
В большинстве случаев вирусные частицы остаются полностью неповрежденными на этапе осветления, даже во время лизиса вирусной вакцины (расщепление обычно осуществляется ниже по потоку, в более очищенной среде).
Основной проблемой вирусного очищения является извлечение высокопродуктивных вирусных частиц при эффективном удалении клеточного детрита, крупных агрегатов и нерастворимых загрязняющих веществ. Как описано в следующих разделах, существует несколько факторов, которые могут вызвать деградацию или потерю вируса. Кроме того, на вирусный выход может быть трудно положиться из-за высокой изменчивости методов количественного анализа вирусов на этой стадии процесса, особенно для вакцин LAV и VV. Для этих вакцин вирусный выход часто оценивают с помощью тестов на инфекционность, таких как тест на бляшки или тест TCID 50. Тот факт, что некоторые из собранных соединений могут влиять на способность вируса инфицировать индикаторные клетки, увеличивает изменчивость этого количественного подхода.
2.2 Стратегия уточнения вакцины против вируса
Вирусные вакцины сильно различаются по размеру, структуре, форме и системам экспрессии (таблица 3).
В результате, как правило, нет шаблона для его последующих процессов, особенно этапов осветления. Теоретически, все доступные методы (низкоскоростное центрифугирование, микрофильтрация TFF, NFF) могут быть выбраны и потенциально объединены для осветления вируса. Фактически, успех методов осветления зависит от системы экспрессии и физико-химических свойств вовлеченных вирусов.
Recently, the high cell density process of viral vaccines is being explored. High cell density processes add to the challenge of clarification. Many treatment methods are by preconditioning, i.e. polymer-induced flocculation, precipitation, alternating TFF, etc. For example, Tomic et al. describe a method for high cell density collection (>{{0}} клеток / мл) метод очистки с использованием катионных полимеров сократил площадь глубокой фильтрации в 4 раза по сравнению с традиционными методами. Этот метод позволяет собирать ферментеры большой емкости без использования центрифуг. Аналогичным образом, Риске и др. показали, что обработка хитозаном 40 л клеточных культур (0,02%), содержащих 1.4-2.6% твердых веществ, привела к 7-кратному увеличению абсолютной производительности фильтра после глубокой фильтрации.
Они также упоминают, что хитозан, по-видимому, повышает эффективность очистки путем флокуляции субмикронных частиц, которые обычно оседают в центрифугах. Методы предварительной обработки и флокуляции, вероятно, продолжат оставаться частью будущих фильтрационных очисток вакцин. Пенетранты, включая сахара, гликоли и аминокислоты, преимущественно флоккулируют вирусы. Флокуляция вирусов осмотическим раствором с последующей микрофильтрацией 0.2μ может использоваться в качестве комплексного процесса очистки вирусов. Пенетранты могут стимулировать агрегацию вирусов, уменьшая слой гидратации вокруг частиц для флокуляции гидрофобных неинкапсулированных вирусных частиц и инкапсулированных вирусных частиц. Хотя было показано, что пенетранты флоккулируют вирусы, этот метод имеет потенциал стать платформой для будущей очистки вакцин, и его осуществимость в пилотной или крупномасштабной очистке вакцин не была доказана. Метод предварительной обработки флокуляцией, который, вероятно, продолжит быть частью будущей очистки фильтров вакцин, выполняется в ферментере объемом 2 л. Для потенциального использования в крупномасштабных производственных операциях эти методы должны быть проверены в пилотных и производственных масштабах.
2.2.1 Выражение системного воздействия
Метод очистки в основном зависит от типа процесса вверх по течению и системы экспрессии, которая определяет тип и уровень загрязняющих веществ, которые необходимо удалить. Вирусные вакцины обычно производятся в куриных эмбрионах с помощью непрерывных клеточных линий млекопитающих или птиц или бакуловирусных/клеток насекомых, которые представляют собой более сложную систему экспрессии. Некоторые типы VLP могут также производиться другими гетерологичными системами экспрессии (бактерии, дрожжи, растительные клетки).
2.2.1.1 Вирус, полученный в курином эмбрионе
Вакцины производятся в яйцах уже несколько десятилетий. Эта работа восходит к 1931 году, когда Вудрафф и Гуд Пасчер успешно использовали хориоаллантоисную мембрану оплодотворенных яиц в качестве субстрата для роста вирусов. Сегодня многие вакцины для людей и животных по-прежнему производятся с использованием этого древнего процесса. Наиболее известной, вероятно, является вакцина против сезонного гриппа. Принцип заключается в инокуляции куриных яиц интересующими вирусами, а затем в репликации в хориоаллантоисной мембране. После размножения аллантоисная жидкость, богатая вирусными частицами, собирается и очищается.
Аллантоисная жидкость является сложным осветляющим кормом. Высокое содержание минералов и белков (включая овальбумин) придает ей высокую вязкость. Аллантоисная жидкость также содержит основные тканевые соединения из куриных эмбрионов, такие как перья, клювы, кровеносные сосуды или клетки крови. Из-за высокого содержания твердых веществ низкоскоростное центрифугирование является предпочтительным вариантом для первичного осветления, обычно приводя к степени извлечения около 70%. Однако первичное осветление с использованием методов фильтрации также возможно. Для NFF полипропиленовые и целлюлозные глубокие фильтры обладают хорошими возможностями сбора аллантоисной жидкости. Поверхностные фильтры, изготовленные из полипропиленовых или целлюлозных глубоких фильтров, могут иметь производительность 150-210 л/м² и снижать мутность потока подачи до 3 раз. Устройство TFF с открытым каналом подачи также подходит для осветления аллантоисной жидкости, поскольку устройство больше подходит для минимальной потери давления через канал подачи, тем самым уменьшая закупорку канала.
Вторичный этап осветления можно легко осуществить с помощью NFF. Комбинация полипропиленовых, целлюлозных и стекловолоконных материалов обычно показывает хорошую эффективность, а альтернативой вторичному этапу осветления является использование TFF и микрофильтрационного мембранного устройства {{0}}.65μm или 0.45μm и управление осмотическим потоком. На этом этапе можно использовать открытоканальное устройство TFF с гидрофильной PVDF или гидрофильной PES мембраной.
Важно отметить, что вирусные частицы могут быть связаны с нерастворимым мусором, что может значительно снизить производство вирусов во время осветления. Использование солевого раствора может снизить эту связь между вирусами гриппа и твердыми фрагментами, что приведет к примерно двукратному увеличению производства без нарушения целостности вирусных частиц.
2.2.1.2 Вирусы, полученные в последовательных линиях клеток млекопитающих и птиц
В последнее время некоторые вирусные вакцины перешли от процессов на основе яиц к процессам на основе клеточной культуры (особенно для вакцин против гриппа). Основной причиной этого перехода является предотвращение проблем с производством вакцин, связанных с эмбриональными яйцами (т. е. дефицита поставок яиц, который может возникнуть в случае вспышки любого заболевания домашней птицы). В результате многие типы вакцин и вирусных векторов в настоящее время разрабатываются с использованием постоянных линий клеток млекопитающих или птиц, обычных линий клеток (таких как линии клеток Vero, MDCK или HEK293) или фирменных линий клеток.
В зависимости от системы экспрессии вирус может оставаться внутри клетки, требуя стадии лизиса клеток, или может оставаться вне клетки (лизис или почкование). Твердая нагрузка и растворимое содержимое, полученные из клеточной культуры, намного чище, чем аллантоисная жидкая фаза. В результате технология NFF проще в реализации, а ее производительность значительно выше. Однако производительность фильтрации сильно зависит от условий культивирования клеток, таких как плотность клеток или жизнеспособность клеток при сборе. Эти параметры влияют на количество клеточного детрита и макроагрегатов, которые могут засорять глубокие фильтры и мембраны, что приводит к снижению производительности.
Томассен и др. приводят хороший пример очистки NFF. Используется в процессе производства инактивированного полиовируса (ИПВ). Клетки Vero, культивируемые на микроносителях, использовались для вирусной пролиферации с плотностью клеток {{0}}.78 x 106 клеток / мл TOI. Для предварительной очистки с целью удаления микроносителей из урожая используется сито из нержавеющей стали 75 мкм. Двухслойная сортировка очищается с использованием фильтра глубокой плотности (0.2-2.0 мкм), за которым следует стерилизованный фильтр.
Выбранный масштабируемый одноразовый блок был успешно использован для подготовки материала для клинических испытаний Sabin IPV в масштабе 350 л. В зависимости от серотипа вируса достигается степень извлечения вируса от 86 до 96 процентов.
2.2.1.3 Бакуловирусные/вирусоподобные частицы, образующиеся в системе клеток насекомых
Рассмотрение систем бакуловирус/клеток насекомых для крупномасштабного производства вакцин является относительно новым, но привлекает все больший интерес в области вирусных векторов и VLP. Главное преимущество этой системы заключается в том, что она предполагает кратковременное (нет необходимости устанавливать клеточные линии) и безопасное (нет полной вирусной ДНК) производство. Есть также некоторые недостатки, такие как необходимость удаления бакуловируса и стабильность продукта.
Cervarix, вакцина VLP против папилломавирусной инфекции человека, производимая GlaxoSmithKline, является первой вакциной для человека, которая будет производиться в коммерческих целях в клетках насекомых. В настоящее время разрабатывается ряд вакцин на основе VLP и векторов rAAV, полученных в инфицированных бакуловирусом клетках насекомых. Линии клеток насекомых, полученные от осенней совки Spodoptera frugiperda (Sf9 и Sf21) и капустной гусеницы Trichoplusia ni (клетки BTI-TN5B1-4), являются наиболее часто используемыми из-за их способности расти в суспензии, что упрощает усиление восходящего процесса. После выращивания до желаемой плотности живых клеток эти клетки заражаются рекомбинантным бакуловирусом в фазе экспоненциального роста клеток для экспрессии белка. Большой геном бакуловирусов позволяет экспрессировать пять или более различных белков, что соответствует сложности VLP и вирусных векторов.
Бернард и др. описали нисходящий процесс культивирования клеток насекомых. Процесс очень изменчив, что отражает разнообразие белков, производимых с помощью этой техники. Первый этап последовательности очистки в значительной степени зависит от объемных характеристик биореактора (т. е. плотности и жизнеспособности клеток) или от характера высвобождения продукта (секретируемого почкованием или лизисом клеток). Бакуловирусная инфекция клеток насекомых может вызвать лизис клеток в течение 3-5 дней. Разрушение клеток может привести к повышению протеолитической активности и другим факторам окружающей среды, которые могут привести к деградации рекомбинантных белков.
Были попытки разработать бакуловирусы с меньшей способностью инициировать лизис клеток. Бакуловирус лизирует менее 10 процентов инфицированных насекомых.
Лизис клеток может быть выполнен с использованием различных методов, таких как замораживание-оттаивание, детергенты, гомогенизаторы или ультразвуковая обработка. У клеток насекомых нет клеточной стенки, поэтому они быстро растворяются. Хотя ультразвуковая обработка была описана во многих лабораторных процессах, она редко используется в экспериментальных или коммерческих масштабах. Наиболее распространенным методом является использование гомогенизатора для разрушения клеток в присутствии детергента низкой концентрации (0.1% Triton X-100 или NP-40). Использование детергентов и микрофлюидизации или осмотической ударной гомогенизации успешно применялось во многих крупномасштабных производственных процессах. Обычно клетки насекомых суспендируют в буферах лизиса (50 мМ TRIS pH7.7, 300 мМ NaCl, 5% глицерина, 0,2 мМ PMSF и ингибиторы протеазы), в ходе чего добавляют Triton-X100 до конечной концентрации 0,1%, после чего проводят мягкий ультразвук или микрофлюидизацию. Затем смесь центрифугируют для удаления нерастворимых частиц.
На этом этапе лизат может казаться очень мутным и его трудно фильтровать с помощью фильтра 0.45μm. Иногда потери до 30% могут наблюдаться на этапе осветления пиролизом. Добавление бензоферментов на этапе расщепления помогает решить проблему фильтрации. Очистка клеток фосфатным буферным рассолом после сбора и быстрое «замораживание-оттаивание» в высоком солевом растворе (500 мМ NaCl), содержащем буфер для крекинга, помогает удалить агрегаты.
Очищение VLP и вирусных векторов, производимых клетками насекомых, происходит после лизиса клеток (химической или механической обработкой), который высвобождает не только вирусные частицы, но и большое количество клеточной нуклеиновой кислоты. Клетки насекомых способны расти при высокой плотности клеток, от 1-9.10 6 клеток/мл. Поэтому этап очищения должен иметь дело с высокой плотностью клеток, высоким содержанием нуклеиновой кислоты и, по возможности, удалением частиц бакуловируса. Чтобы усложнить ситуацию, VLP или вирусные векторы и бакуловирусы могут иметь схожие размеры (бакуловирусы имеют ширину 60-80 нанометров и длину 300-400 нанометров). Из-за высокой плотности клеток центрифугирование было предпочтительным методом первичного очищения в течение десятилетий. Однако мембранные процессы кажутся очень привлекательной альтернативой, поскольку масштабируемость легко определить.
Глубокие фильтры эффективно использовались в нисходящем процессе трехслойных ротавирусоподобных частиц. На лабораторном уровне метод ультрацентрифугирования в градиенте плотности CsCl часто используется для очистки этих сложных частиц. Исследователи оценили не только этап осветления глубокого фильтра, но и весь нисходящий процесс (расщепление Triton X-100 и глубокая фильтрация с последующей ультрафильтрацией и исключением размера частиц). Результаты показывают, что выход градиента плотности CsCl может достигать 37%.
Ультрацентрифугирование составляет около 10%. В качестве другого примера, полые волокна 0,45 мкм и тонкие волокна диаметром 500 кДа использовались для извлечения и концентрирования ВИЧ-подобных частиц, полученных в клетках насекомых. В этом исследовании сдвиговое усилие полых волокон было оптимизировано на основе целостности клеток. Результаты Был создан процесс с низким сдвиговым усилием для замены ультрацентрифугирования градиента столового сахара.
Процесс имеет потенциал для применения в массовом производстве. Глубокие фильтры также успешно использовались в производстве рекомбинантных аденоассоциированных вирусов. Лизис клеток выполнялся с помощью двухпоршневого механического клеточного глушителя с последующей обработкой нуклеазой. На этапе осветления использовался элемент глубокого фильтра из стекловолокна 1,2 мкм, за которым следовали два слоя 0.8 мкм гидрофильного ПЭС и 0.2 мкм гидрофильного ПЭС. Фильтры пропорционального размера используются для партий процесса от меньших до 200 L размеров. Глубокие фильтры успешно использовались, и также сообщалось, что рейтинги TFF с плоскими пленками или полыми волокнами 0,2 мкм или 0,45 мкм очень эффективны.
Исследование Tecnologica (IBET) в Институте экспериментальной биологии Оэйраш в Португалии использовало NFF для проведения очистки VLP гепатита С, экспрессируемых бакуловирусами, без центрифугирования. Номинально оцененные полипропиленовые фильтры (фильтры 10,5,0.6 и 0.3 мкм) используются для очистки сбора VLP. Те же фильтры с порами 0.6 мкм и 0,3 мкм используются для фильтрации в центрах сбора VLP. Все исследованные фильтраты были протестированы на скорость восстановления VLP HCV, и были сравнены рекомендуемые методы фильтрации. Результаты показаны в таблице 4.
Результаты показали, что фильтр 5 мкм-0.3 мкм имел наивысшую степень извлечения продукта (100%) для непосредственно собранного корма с вирусоподобными частицами гепатита С. Фильтр из полипропилена 0,6 мкм имел наивысшую степень извлечения продукта (82%) для центрального корма, а очистка ДНК клетки-хозяина составила около 70%.
2.2.1.4 Вирусоподобные частицы, образующиеся в бактериальных или дрожжевых системах
Тип метода очистки для вакцин VLP, экспрессируемых в бактериальных или дрожжевых системах, зависит от высвобождения VLP во внеклеточные медиаторы. Если VLP не могут быть эффективно секретированы, могут потребоваться лизис клеток или другие этапы экстракции перед фактическим этапом очистки. Хотя это является золотым стандартом в индустрии очистки белков, центрифугирование (непрерывное или периодическое), экспрессируемое в бактериальных или дрожжевых системах, в последнее время мембранные процессы стали очень привлекательной альтернативой из-за их простоты масштабирования и совместимости с одноразовыми методами лечения.
Рихтер и Топелл объясняют использование центрифугирования, TFF или их комбинации при подготовке VLP, полученных в очищенной E. coli. В их работе мембраны TFF 0.45m использовались для разбавления и осветления гомогенизированных гомогенатов E. coli при температуре 5 градусов. Они также отмечают, что TFF на основе мембран подходит для обработки высоковязких урожаев, предпочтительно с использованием установок TFF с открытыми конфигурациями каналов.
Центрифугирование также было оценено как альтернатива TFF. В этом случае полученный гомогенат не разбавлялся и центрифугировался при 4 градусах в течение 105 минут, 10000g. Не перенося мягкое покрытие, супернатант выливался из частиц и повторно центрифугировался при 4 градусах и 10 000 g в течение 60 минут. Затем супернатант удалялся из присутствующих частиц, разбавлялся буфером EB (43,89 мМ Tris HCl, 6,11 мМ Tris Base, 5,0 мМ EDTA, 10% (об./об.) Triton X-100) 1:2 и фильтровался на стерильном фильтровальном устройстве 0,22 м. Дальнейшая обработка. Сообщается также, что процесс масштабирования производства этой вакцины VLP в E. coli в масштабе 800 л был прояснен благодаря сочетанию центрифугирования и TFF.
Рекомбинантная вакцина против гепатита Е HEV 239 была лицензирована в Китае для иммунизации взрослых в возрасте 16 лет и старше. Вакцинные антигены (VLP) экспрессируются в E. coli, и было продемонстрировано масштабирование процесса производства антигена в масштабе 50L. Продукт был извлечен путем растрескивания E. coli, а тельца включения были отделены от фрагментов клеток путем интенсивной промывки буфером, содержащим 2% Triton X-100, а затем растворены в гомогенизаторе с мочевиной 4 M. TFF очищает VLP вируса папилломы человека, произведенные в Saccharomyces cerevisiae (15L). Клеточный лизат, обработанный нуклеазой, был очищен с помощью микрофильтрации с поперечным потоком в режиме трансфильтрации с использованием фильтра из полых волокон 0,65 мкм. Тот же процесс используется при производстве вакцин. Хотя лишь немногие вакцины на основе VLP достигли коммерческого масштаба, несколько вакцин на основе VLP находятся в стадии разработки, большинство из которых очищаются с помощью центрифугирования или мембранной технологии.
Ограниченные влиянием пространства, мы поделимся второй половиной содержания в следующей главе. В следующей статье мы поделимся некоторыми случаями разъяснения вакцин и использования соответствующих мембранных компонентов.
Как первая компания в цепи локализации, Guidling Technology накопила достаточный соответствующий опыт в очистке вакцин. Guidling Technology — это компания по разработке и производству, специализирующаяся на биофармацевтике и клеточной культуре, очистке и разделении. Продукция широко используется в биомедицине, диагностике, промышленной фильтрации жидкостей, обнаружении, очистке, очистке и концентрировании; Guidling успешно разработала ультрафильтрационную центрифужную пробирку, ультрафильтрационную/микрофильтрационную мембранную кассету, фильтр для удаления вирусов, тангенциальное проточное фильтрующее устройство, глубокий мембранный стек и т. д., которые полностью соответствуют сценариям применения биофармацевтики и клеточной культуры.
Наши мембраны и мембранные фильтры широко используются в концентрировании, экстракции и разделении предварительной фильтрации, микрофильтрации, ультрафильтрации и нанофильтрации. Наш широкий ассортимент продукции, от небольших одноразовых лабораторных фильтров до систем фильтрации производственного типа, испытаний на стерильность, ферментации, культивирования клеток и многого другого, может удовлетворить потребности испытаний и производства.
