Последующий процесс очистки вакцины против диареи свиней

Диарея является одним из трех основных заболеваний, которые нанесли большой экономический ущерб свиноводству Китая. Существует множество факторов, вызывающих диарею у свиней, и вирусные факторы являются наиболее серьезными. Заразиться могут свиньи всех возрастов, особенно молочные поросята, а смертность после заражения может достигать более 50%. Вирус эпидемической диареи свиней (ВЭДС) и вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГЕВ) широко распространены в мире, и эти два вируса могут заражаться по отдельности или в сочетании. В настоящее время не существует специфических препаратов для лечения ВЭДВ и ТГВ, а для профилактики и борьбы с диареей свиней используются в основном коммерческие вакцины.

Традиционные вакцины против эпидемической диареи свиней в основном включают инактивированную цельновирусную вакцину и живую аттенуированную вакцину. В клинической практике обычно используются тандемная инактивированная вакцина или аттенуированная вакцина против PEDV и TGEV, а также тройная инактивированная или аттенуированная вакцина против PEDV, TGEV и ротавируса свиней (RV), в основном тандемная вакцина против PEDV и TGEV.

В настоящее время в Китае имеется множество вакцин против эпидемической диареи свиней.

Процесс производства инактивированных и аттенуированных вакцин аналогичен и в основном включает пять этапов: культивирование патогена, инактивация или аттенуация патогена, извлечение и очистка патогена, приготовление и упаковка вакцины, а также контроль качества вакцины. В этой статье в основном представлена ​​процедура очистки патогенов.

Разъяснение

Целью осветления является обеспечение удаления клеточного мусора и других агрегатов крупных частиц. При производстве клеточной культуры различных ядов, помимо содержания большого количества вирусных частиц, имеется много остатков клеточной ткани, продуктов метаболизма и других примесей, что делает яд в мутном или полумутном состоянии, что является прямым использование этой операции по концентрации яда вскоре приведет к блокировке ультрафильтрационной мембраны и не сможет завершить концентрацию яда, что приведет к поломке ультрафильтрационной мембраны. Поэтому, прежде чем яд концентрировать, его необходимо предварительно осветлить, что обычно проводят с помощью низкоскоростного центрифугирования и мембранной фильтрации. Следует отметить, что при использовании технологии мембранного разделения, поскольку материал мембраны часто содержит электроотрицательные или гидрофобные группы, необходимо исследовать, обладает ли материал мембраны адсорбцией вирусных частиц.

Эффективный этап осветления требует сочетания высокой производительности по удалению твердых частиц и высокого выхода продукта, простоты амплификации и защиты последующих операционных установок. В настоящее время для операции осветления используется глубокий фильтр.

Однако при слишком больших масштабах культивирования потребуется большое количество мембран глубинного фильтра, что приведет к существенному увеличению стоимости расходных материалов. В то же время высокая плотность клеточной культуры снизит нагрузку на мембрану глубокого фильтра, что приведет к увеличению затрат и чрезмерному разбавлению продукта.

В методе микрофильтрации в основном используется устройство фильтрации с тангенциальным потоком, а мембранные компоненты представляют собой плоскую мембранную кассету и полое волокно. Тангенциальная поточная фильтрация (TFF) осуществляется за счет разницы трансмембранного давления. Вещества и примеси, размер которых меньше размера пор мембраны, проходят через мембрану, в то время как примеси, такие как клетки с более крупными частицами, улавливаются. Размер пор мембраны, используемой для микрофильтрации, составляет {{0}},45/0,22 мкм. Тангенциальная поточная микрофильтрация с полыми волокнами позволяет напрямую перерабатывать жидкости с высоким содержанием твердых частиц, такие как среда для культивирования клеток высокой плотности, позволяет исключить этапы центрифугирования и предварительной фильтрации с меньшим количеством этапов и простотой эксплуатации, мембрану можно использовать повторно посредством очистки, что снижает затраты на оборудование и эксплуатацию. затраты, соответствующие требованиям модульного автоматизированного производства.

Концентрация и очистка

После предварительного осветления среда культивирования вируса по-прежнему содержит большое количество примесей, в том числе дефектные частицы, вирусную оболочку, цитотоксин, среду, сыворотку и фрагменты клеток и т. д. Если эти примеси вводятся животным, они будут влиять не только на эффективность лечения. вакцину, но и вызвать сильный иммунный ответ хозяина и даже привести к гибели вакцинированных животных. Следовательно, необходимы концентрация и очистка для удаления примесей, таких как гетеропротеины и фрагменты клеток, усиления и индукции эффективных иммунных ответов, уменьшения количества используемой вакцины и уменьшения побочных реакций.

Принцип очистки вируса: поддерживать биологическую активность и инфекционность вируса как предпосылку, удалять вирусные примеси и добиваться высокой чистоты вируса.

В настоящее время основными методами концентрирования и очистки, применяемыми в крупнотоннажном производстве, являются ультрафильтрация.

Метод ультрафильтрации, в основном используется устройство ультрафильтрации с тангенциальным потоком, система фильтрации с полыми волокнами и другое фильтрующее оборудование. При нормальных обстоятельствах применение метода ультрафильтрации может увеличить концентрацию вируса более чем в 100 раз, степень удаления гетеропротеина до 99%. Среди них технология мембранной фильтрации из полых волокон имеет такие преимущества, как мягкая и низкая сила сдвига, простота закупоривания, гибкость в эксплуатации, длительный срок службы и низкая стоимость, а также простота усиления, поэтому для концентрации и очистки вирусов рекомендуется выбирать полое волокно.

Когда для концентрирования и очистки используется метод ультрафильтрации, очень важно выбрать подходящий размер пор мембраны, который напрямую определяет эффективность и качество концентрирования. С одной стороны, необходимо выбрать отверстие мембраны для эффективного захвата целевых молекул и обеспечения выхода, а с другой стороны, следует полностью учитывать эффект удаления и скорость обработки гетеропротеинов. Поэтому лучший принцип — выбрать мембрану с наибольшим размером пор, которая может улавливать целевую молекулу, и попытаться выбрать фильтрующую мембрану с равномерным распределением размеров пор.

Вирус эпидемической диареи свиней (ВЭДВ) и вирус трансмиссивного гастроэнтерита (ТГЕВ) представляют собой коронавирусы, представляющие собой полиморфные сферы с перевернутыми шипообразными шипами диаметром от 60 до 190 нм. Ротавирусная болезнь — это зоонозное заболевание, при котором ротавирус (РВ) имеет форму колеса и имеет диаметр около 70 нм. Эти три вируса обычно можно перехватить с помощью ультрафильтрационных мембран с апертурой 100-750kd.

Guidling Technology — национальное высокотехнологичное предприятие, специализирующееся на биофармацевтических препаратах, культурах клеток, очистке и концентрации биомедицинских препаратов, диагностике и промышленных жидкостях. Мы успешно разработали центробежные фильтрующие устройства, кассеты для ультрафильтрации и микрофильтрации, вирусный фильтр, систему TFF, глубинный фильтр, полое волокно и т. д., которые полностью соответствуют сценариям применения биофармацевтических препаратов, клеточных культур и т. д. Наши мембраны и мембранные фильтры широко используются в процессах концентрации, экстракции и разделения предварительной фильтрации, микрофильтрации, ультрафильтрации и нанофильтрации. Наши многочисленные линейки продуктов, от небольших одноразовых лабораторных фильтров до производственных систем фильтрации, тестирования на стерильность, ферментации, клеточных культур и многого другого, отвечают потребностям тестирования и производства. Guidling Technology надеется на сотрудничество с вами!